La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y biológicas, es una técnica de laboratorio que utiliza la luz para medir sustancias en disolución.
Por lo tanto podemos decir que se fundamenta en que la luz atraviesa una dilución y al incidir sobre la sustancia sufre una modificación en la trayectoria de los rayos que se encuentra en relación con la concentración de la disolución.
Por lo tanto podemos decir que se fundamenta en que la luz atraviesa una dilución y al incidir sobre la sustancia sufre una modificación en la trayectoria de los rayos que se encuentra en relación con la concentración de la disolución.
Las sustancias que se emplean son disoluciones con color y que son capaces de absorber una determinada λ; estas sustancias se llaman cromógenos. Al radiar el cromógeno se deben eliminar aquellas radiaciones que no absorba, y sólo se radia con aquella luz monocromática que sea capaz de absorber la sustancia a medir. Las radiaciones que no son de la misma λ de onda que las absorbidas por la sustancia pasaran de largo y serán recogidas por el sensor. La cantidad de luz que deja pasar va en relación con la cantidad de soluto en disolución que tenemos (concentración de cromógeno); todos estos procesos se realizan en un aparato llamado espectrofotómetro.
Un espectrofotómetro típico posee cuatro componentes basicos: una fuente de radiacion que tiene intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre ( usualmente es lampara de tungsteno para luz visible,y deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la muestra, un monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la muestra, y un fotodetector, que mide cuantitativamente la radiacion que pasa por la muestra.
En general, los espectrometros miden en % de transmitancia (T) y absorbancia (A). El porciento de transmitancia se refiere a la cantidad de radiacion que pasa a traves de la muestra y alcanza el detectoro sensor. Una solucion limpida, no absorbente, mostrara una lectura de 100% de transmitancia en un espectrofotometro calibrado. Las unidades de absorbancia van de 0 a 2. La absorbancia se relaciona con la transmitancia como
A =- log 1/T, (logaritmo decimal).